【关键词】中药指纹图谱

　　中药指纹图谱是指中药材经适当处理后，采用一定的分析手段，得到的能够标示该中药材特性的共有峰的图谱[1].指纹图谱应该具备指纹性，即：（1）专属性强。指所制订的指纹图谱应该是该药材所独有的、能与其它药材相区别的，其反映的化学信息是具有高度的选择性的；（2）稳定性好。即中药材的指纹图谱应该是从某中药材的多批次中归纳出的共性，图谱中的共有峰或特征峰应相对稳定；（3）重现性好。所制订的指纹图谱在规定条件下应能再现指纹特征（如共有峰数目、大小、位置等），其误差应在允许的范围内。只有这样，所制订的指纹图谱才具有实用价值。中药指纹图谱是借助于波谱或色谱技术获得的中药（主要是植物药）次生代谢化学成分的光谱图或色谱图[2].中药指纹图谱的构建主要分四类：色谱法、光谱法、X射线衍射法、分子生物化学技术，这些方法在中药指纹图谱中都具有广泛的应用。

　　1中药指纹图谱的应用

　　许多现代色谱、光谱分析技术在中药指纹图谱测定中都有应用，如薄层色谱（TLC）[3]、高效液相色谱（HPLC）[4]、核磁共振（NMR）[5]、质谱（MS）[6]、紫外色谱（UV）[7]、红外色谱（IR）[8]、X-射线衍射[9]，以及先进的光色谱联用技术[10]最近也已被采用，另外如高速逆流色谱（HSCCC）[11]、高效毛细管电泳色谱（HPCE）[12]等较新兴的分离技术也在指纹图谱测定方面有了一定的应用。HPLC是近30年发展起来的一种具有高灵敏度、高选择性、高效、快速的分离分析技术。在药品的质量控制（如主要成分的定性定量分析、杂质的限量检查和测定、稳定性考察等）、中药的成分研究等方面都是重要的分析手段，在药典中鉴别项下越来越多的使用到此方法，它给出的是高分辨率的轮廓图谱，重现性好，操作相对容易，而且相比于薄层色谱是封闭系统色谱，在线操作外界影响因素小，色谱稳定性好，在线检测设备可选性较大，很适合指纹图谱的实验研究和应用。以下将对近几年来主要的HPLC指纹图谱的应用加以介绍。

　　2高效液相色谱在中药指纹图谱的应用

　　李菁等[13]采用HPLC测定七叶皂苷钠，并用蒸发光检测器（ELSD）检测，得到HPLC-ELSD指纹图谱。对不同注射用七叶皂苷钠样品的比较研究表明，HPLC-ELSD指纹图谱准确的显示了样品的质量，结果直观、可靠。周玉新等[14]以HPLC梯度洗脱法对三七原药材、三七总皂苷提取物及以三七总皂苷为原料制成的市售注射液进行了指纹图谱研究。该方法可操作性强、重现性好，可作为三七药材及含三七主成分注射剂指纹图谱研究的基础的色谱指纹图谱。颜玉贞等[15]用优化的高效液相色谱试验条件，梯度洗脱，紫外检测，测定并记录色谱图，进行辨认、分析，所获得的色谱指纹图谱具有良好的重现性，可以明确鉴别西青果和诃子。从指纹图谱追踪初步证明试验所用的所有西青果是大诃子的幼果。杨光明等[16]对川芎药材进行指纹图谱研究，对来源于不同地区的川芎进行了比较。采用KromasilKRl005C18分析柱，0.5％H3PO4-H2O与0.5％H3PO4-CH3OH梯度洗脱，流速1mL/min，柱温25℃，DAD检测器，检测波长280nm，参比波长360nm.确定了川芎药材指纹图谱的高效液相分析条件，建立了川芎的特征指纹图谱。游松等[17]以芦丁为内标物，采用HPLC法分析银杏黄酮苷。结果表明银杏叶药材、中间体及注射剂的指纹图谱有较好的相关性，所有共有峰的参数符合国家药品监督管理局关于有关中药注射剂的技术要求，有助于银杏叶药材的标准化种植及其制剂的质量控制。刘艳华等[18]采用高效液相色谱法建立丹参药材的指纹图谱，以AlltechC18（4.6mm×250mm，5μm）为色谱柱，1％冰醋酸水溶液和1％冰醋酸甲醇溶液采用梯度洗脱，流速1.0mL／min，检测波长281nm.结果显示精密度和重复性试验中各共有峰相对峰面积的RSD均小于5％，符合有关规定，该方法可作为控制丹参药材内在质量的标准。邹忠梅等[19]研究芍药总苷的高效液相色谱指纹图谱，为科学评价及有效控制其质量提供可靠方法。他们利用HPLC-DAD方法，梯度洗脱，测定了10批芍药总苷样品。色谱条件为：SupelcosilTMLCl8分析柱（5μm，150mm×4.6mm），柱温25℃，流动相A为乙腈，流动相B为水（磷酸调pH为3.0），流动相A梯度洗脱（10％～45％乙腈），分析时间为50min，时间为0、5、25、27、38、40、50min，A（％）为10、15、18、30、35、40.结果表明芍药总苷的指纹图谱特征性及专属性强，可结合含量测定用于全面控制芍药总苷的质量，确保每批产品的均一性。沈嘉等[20]以HPLC指纹图谱区分不同工艺、不同原料制备的黄连解毒汤（黄连、黄芩、黄柏、栀子）制品及日本汉方黄连解毒汤制剂。采用C18V反相色谱柱，二元梯度洗脱，二极管阵列检测器，以芍药苷为内标作为相对标准。结果共有15～16个特征峰为共有峰，但新工艺制品和醇提物出现1个独特的特征峰，与其它制品不同。各不同工艺及原料制品的特征峰与内标峰的峰高比有显著性区别。试验结果稳定，重复性良好，作者认为HPLC指纹谱可作为本复方中药不同工艺及原料制品的鉴别标准。刘艳娥等[21]采用高效液相色谱梯度洗脱法，选用ZorbaXSB-C18（5μm，4.6mm×250mm）色谱柱，流动相：（A）甲醇-0.05％磷酸溶液（10∶90），（B）甲醇-0.05％磷酸溶液（60∶40）梯度洗脱，检测波长为238nm，采用线性梯度洗脱程序。流速：1mL/min，运行时间60min.结果确定了金银花药材有11个共有峰，该方法可靠，为提高金银花药材质量控制标准提供参考。陈闽军等[22]用高效液相色谱法测定参麦注射液中人参皂苷Rg1和Rb1的含量，并用所检测到的指纹图谱考察参麦注射液不同批次产品内在质量的一致性。实验采用汉邦C18（5μm，250mm×4.6mm）色谱柱，流动相A为50mmol/LKH2PO4溶液，B为乙腈-水（80∶20），pH=3.5梯度洗脱，流速1mL/min，检测波长为202nm，柱温为40℃。结果人参皂苷Rg1和Rb1的加样回收率>99％，RSD<1.2％，人参皂苷Rg1和Rb1分别在4.20～42.0μg和3.30～33.0μg范围内线性关系良好，色谱指纹图谱中分离出30多个峰。实验表明将指标性成分人参皂苷Rg1和Rb1的含量测定与色谱指纹图谱比较分析相结合，可提高参麦注射液的内在质量控制水平。马仁玲等[23]对苦参药材用不同提取方法进行化学成分分析，采用高效液相色谱／电喷雾离子化质谱联用技术对苦参药材不同的提取方法进行研究，结果表明氯仿-浓氨溶液提取法、火溶液提取法、水-甲醇溶液提取法获取生物碱和黄酮依次为9、8和12种。该试验首次采用LC／ESI／MS联用技术对苦参药材的提取方法进行了研究，为中药苦参指纹图谱的建立提供了依据。曹敏等[24]采用高效液相色谱法建立栀子药材的指纹图谱，以AlltechC18（250mm×46mm，5μm）为色谱柱，采用水和甲醇溶液梯度洗脱，流速10mL/min，检测波长440nm.结果精密度和重复性试验中对峰面积大于20％的共有峰，其相对峰面积的RSD均小于5％，符合《中药注射剂指纹图谱研究的技术要求（暂行）》中有关规定，本方法可作为控制栀子药材内在质量的标准。

　　中药各组分在色谱图上的色谱行为可用于中药品种的鉴定和质量控制。HPLC法具有流动相选择性广、重现性好、色谱柱可反复使用，实际证明实用的检测器品种较多、需要时各组分收集容易等优点。就目前的普遍性来说，是所有的光谱、色谱中最基本、最适合绘制指纹图谱、用途最广的一种方法。结合数学统计手段以及计算机模拟的方法学研究，将中药体系的内涵进一步标示、定性和量化，得到相对完备的指纹性数据。而联用技术是目前最受重视的手段，HPLC/MS、HPLC/UV、HPLC/NMR、HPLC/MS/MS等联用技术给中药这一复杂未知样品的分析带来了崭新的前景，为中药全组分的分析提供了大量的信息，也必将用于指纹图谱的建立。

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