立克次体是一类严格细胞内寄生的原核细胞型微生物,其培养条件较为特殊且具有一定要求。
首先,从营养要求来看,立克次体不能在人工培养基上生长,必须在活细胞内才能增殖。这是因为立克次体缺乏完整的酶系统,不能独立利用周围环境中的营养物质来合成自身所需的成分,需要从宿主细胞中获取能量、辅酶、氨基酸等营养物质。
在培养方法上,常用的有动物接种、鸡胚接种和细胞培养。动物接种是最早采用的方法,常用的实验动物有豚鼠、小鼠等。将立克次体接种到动物体内,如腹腔接种豚鼠,立克次体可以在动物的组织细胞内生长繁殖,通过观察动物的发病情况以及检测组织中的立克次体来进行研究。鸡胚接种一般选用孵化 6 - 7 天的鸡胚,将立克次体接种到鸡胚的卵黄囊中,立克次体可在卵黄囊膜的细胞内生长。这种方法培养立克次体产量较高,且操作相对简便。细胞培养则是目前常用的方法,可选用多种传代细胞系,如 Vero 细胞、L929 细胞等。将立克次体接种到培养的细胞中,在适宜的条件下,立克次体可以在细胞内生长繁殖。
培养环境方面,立克次体生长需要适宜的温度、pH 值等条件。一般培养温度为 32 - 35℃,pH 值在 7.2 - 7.4 之间。同时,培养过程中要保证无菌操作,防止其他微生物的污染,因为污染会影响立克次体的生长和研究结果的准确性。此外,还需要提供一定的气体环境,通常需要 5% - 10%的二氧化碳,以维持细胞的正常代谢和生长,为立克次体的生长提供良好的环境。