方法名称： 利血平原料药—利血平的测定—分光光度法

应用范围： 本方法采用分光光度法测定利血平原料药中利血平的含量。

本方法适用于利血平原料药。

方法原理： 供试品加三氯甲烷溶解，无水乙醇稀释制成供试液，经前处理置紫外可见分光光度计，于390nm波长处测定吸收度，计算出其含量。

试剂： 1. 三氯甲烷

2. 无水乙醇

3. 硫酸滴定液（0.25mol/L）

4. 0.3%亚硝酸钠溶液

5. 5%氨基磺酸铵溶液

6. 甲基红-溴甲酚绿混合指示液

7. 基准无水碳酸钠

仪器设备： 紫外可见分光光度计

试样制备： 1. 硫酸滴定液（0.25mol/L）

配制：取硫酸15mL，缓缓注入适量水中，冷却至室温，加水稀释至1000mL，摇匀。

标定：取在270~300℃干燥至恒重的基准无水碳酸钠约0.75g，精密称定，加水50mL使溶解，加甲基红-溴甲酚绿混合指示液10滴，用本液滴定至溶液由绿色转变为紫红色时，煮沸2分钟，冷却至室温，继续滴定至溶液由绿色变为暗紫色。每1mL硫酸滴定液（0.25mol/L）相当于26.50mg的无水碳酸钠。根据本液的消耗量与无水碳酸钠的取用量，算出本液的浓度。

2. 甲基红-溴甲酚绿混合指示液

取0.1%甲基红的乙醇溶液20mL，加0.2%溴甲酚绿的乙醇溶液30mL，摇匀。

3.对照品溶液的制备

精密称取利血平对照品适量，按供试品溶液制备方法制成每1mL中约含20µg的溶液，即得对照品溶液。

4. 供试品溶液的制备

精密称取供试品约20mg，置100mL量瓶中，加三氯甲烷4mL使溶解，用无水乙醇稀释至刻度，摇匀，精密量取5mL，置50mL量瓶中，加无水乙醇稀释至刻度，摇匀，即得供试品溶液。

注：“精密称取”系指称取重量应准确至称取重量的千分之一。“精密量取”系指量取体积的准确度应符合国家标准中对该体积移液管的精度要求。

操作步骤： 精密量取对照品溶液与供试品溶液各5mL，分别置10mL量瓶中，各加硫酸滴定液（0.25mol/L）1.0mL与新制的0.3%亚硝酸钠溶液1.0mL，摇匀，置55℃水浴中加热30分钟，冷却，各加新制的5%氨基磺酸铵溶液0.5mL，用无水乙醇稀释至刻度，摇匀，另取对照品溶液与供试品溶液各5mL，除不加0.3%亚硝酸钠溶液外，分别用同一方法处理后作为各自相应的空白，照紫外分光光度法，于波长390nm处测定吸收度。

注：分光光度法应以配制供试品的同批溶剂为对照，采用1cm的石英吸收池。以吸收度最大的波长作为测定波长，一般供试品的吸收度读数，以在0.3-0.7之间的误差较小。仪器的狭缝波带宽度应小于供试品吸收带的半宽度，否则测得的吸收度偏低。狭缝宽度的选择，应以减少狭缝宽度时供试品的吸收度不再增加为准。由于吸收池和溶剂本身可能有空白吸收，因此测定供试品的吸收度后应减去空白读数，再计算含量。

参考文献： 中华人民共和国药典，国家药典委员会编，化学工业出版社，2005年版，一部，p.263。