挥发油采用其他方法难以分离的成分可用色谱方法分离。
（1）吸附柱色谱
吸附剂：硅胶、氧化铝、硝酸银络合色谱（双键异构体的分离）。
α-细辛醚、β-细辛醚、欧细辛醚分离医学教|育网搜集整理。
洗脱剂：石油醚洗脱萜烃类，石油醚-乙酸乙酯不同比例洗脱含氧萜。
气相色谱是研究挥发油组成成分的非常有效的方法，近年来，应用制备性气-液色谱，已成功地将挥发油中许多成分分开并予以鉴定。
（2）硝酸银络合色谱
采用上述色谱条件难以分离的挥发油，可用硝酸银一硅胶或硝酸银一氧化铝柱色谱及薄层色谱分离。
分离原理根据挥发油成分中双键的数目和位置不同，与硝酸银形成络合物难易程度和稳定性不同，而达到分离的目的。
例如将α-细辛醚、β-细辛醚和欧细辛醚的混合物，通过用20%硝酸银处理的硅胶柱，用苯-乙醚（5：1）洗脱，分别收集，并用薄层检查，α-细辛醚苯环外双键为反式，与硝酸银络台不牢固，先被洗下来，β-细辛醚为顺式，与硝酸银络合的能力虽然大于α-细辛醚，但小于欧细辛醚，因欧细辛醚的双键为末端双键，与硝酸银结合能力最强，故β-细辛醚第二个被洗下来，欧细辛醚则最后被洗下来。
