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异烟肼对结核分枝杆菌有高度选择性，抗菌作用强。
试管内：0.025——0.05mg/L的浓度均可抑菌，较高浓度10mg/L对繁殖期细菌有杀菌作用。对静止期的结核杆菌，提高药物浓度、延长接触时间，也可有杀菌作用。
对细胞内外的结核杆菌，具有同等的杀灭作用。
单用易产生耐药性，联合用药可延缓耐药性产生，并增强疗效。
异烟肼与其他抗结核病药无交叉耐药性。
机制：抑制结核杆菌的烯酰乙酰基载体蛋白（ACP）还原酶、β酮酰ACP合成酶，抑制分枝菌酸（分枝杆菌细胞壁的重要成分）合成。
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