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药物分析:紫外分光光度法

今天小编带大家看看紫外分光光度法

1.仪器的校正和检定

由于温度变化对机械部分的影响,仪器的波长经常会略有变动,因此除应定期对所用的仪器进行全面校正检定外,还应于测定前校正测定波长。常用汞灯中的较强谱线237.83、 253.65、 275.28、296.73、313.16、334.15、365.02、404.66、435.83、546.07与576.96nm,或用仪器中氘灯的486.02与656.10nm谱线进行校正,钬玻璃在279.4、287.5、333.7、360.9、418.5、460.0、484.5、 536.2与637.5nm波长处有尖锐吸收峰,也可作波长校正用,但因来源不同会有微小的差别,使用时应注意。

吸收度的准确度可用重铬酸钾的硫酸溶液检定。取在120℃干燥至恒重的基准重铬酸钾约60mg,精密称定,用0.005mol/L硫酸溶液溶解并稀释至1000ml,按下表规定的波长处测定并计算其吸收系数。 规定的吸收系数如下表,相对偏差可在±1%以内。

波长 (nm) 235(最小) 257(最大) 313(最小) 350(最大)

吸收系数E1% 1cm 124.5 144.0 48.62 106.6

杂散光的检查可按下表的试剂和浓度,配制成水溶液,置1cm石英吸收池中,在下表规定的波长处测定透光率,应符合表中的规定。

试剂 浓度% (g/ml) 测定用波长(nm) 透光率 (%)

碘化钠 1.00 220 =(A/A)C

式中

C为供试品溶液的浓度;

A为供试品溶液的吸收度;

C为对照品溶液的浓度;

A为对照品溶液的吸收度医,学教育网。

(2) 吸收系数法

按各品种项下的方法配制供试品溶液,在规定的波长处测定其吸收度,再以该品种在规定条件下的吸收系数计算含量。用本法测定时,应注意仪器的校正和检定。

(3) 计算分光光度法

采用计算分光光度法应慎重。本法有多种,使用时均应按各品种项下规定的方法进行。当吸收度处在吸收曲线的陡然上升或下降的部位测定时,影响精度的因素较多,故对照品和供试品测试条件应尽可能一致。若测定时不用对照品,如维生素A测定法,则应在测定时对仪器作仔细的校正和检定。

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