利福平是一种广谱抗生素，主要通过抑制细菌DNA依赖性RNA聚合酶来发挥其抗菌作用。具体来说，利福平能够与细菌的RNA聚合酶β亚单位紧密结合，从而阻止该酶催化转录过程中的RNA合成。这导致细菌无法正常生成所需的mRNA（信使核糖核酸），进而影响蛋白质的合成，最终导致细菌死亡或生长受到抑制。
利福平对结核分枝杆菌、麻风分枝杆菌以及许多革兰氏阳性菌和部分革兰氏阴性菌有较强的抗菌活性。在临床上主要用于治疗肺结核和其他类型的结核病，也用于预防脑膜炎奈瑟菌引起的细菌性脑膜炎等疾病的传播。
值得注意的是，由于利福平的这种作用机制是针对细菌特异性酶的，因此对人体细胞中的相应酶没有影响，这使得它具有较高的选择性和较低的毒性。然而，在长期使用过程中仍需注意其可能产生的副作用，如肝功能损害、消化道反应等，并且在治疗期间应定期监测患者的肝功能指标。
此外，由于单独使用利福平容易导致耐药性的产生，所以在实际应用中通常会与其他抗结核药物联合使用，以提高疗效并减少耐药性的发展。
