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生物实验——生长激素生物检定法

  1.去垂体大白鼠体重法

  本法系通过比较生长激素标准品与供试品对幼龄去垂体大白鼠体重增加的程度,以测定供试品效价的一种方法。

  标准品溶液的配制

  实验当日,取标准品,按标示效价用含0.1%牛血清白蛋白的0.9%氯化钠溶液,配制成高、低两种浓度的稀释液。一般高浓度稀释液配成每1ml含0.1~0.2IU,低浓度稀释液配成每1ml含0.025~0.05IU,高低两浓度比值(r)一般为1∶0.25,稀释液分装成每天剂量并密封-15℃以下保存,临用时溶化。

  供试品溶液的配制

  按供试品的标示效价或估计效价,同标准品溶液的配制及保存方法。

  动物取同一来源、品系,出生26~28天,体重60~80g,同一性别、健康的大白鼠,试验前2~3周手术摘除垂体,手术后于清洁级以上动物室饲养使其恢复,备用。

  检查法:取去垂体手术后2~3周、体重变化小于手术前±10%的大白鼠,按体重均匀分成4组,每组至少8只,每只编号并记录体重。分别自颈部皮下注射一种浓度的标准品或供试品溶液0.5ml,每日一次,连续6日。最后一次给药后24小时,处死大鼠,称重,必要时实验结束后可进行尸检,切开蝶鞍区,肉眼检查有无垂体残留,剔除有垂体残存的动物。每只动物给药后体重增加的克数作为反应值。供试品与标准品各剂量组所致反应的平均值应相当,低剂量组应较未给药组体重有明显的增加,高剂量组体重增加不致达极限。实验结果按“生物检定统计法”(附录ⅪⅤ)中的量反应平行线测定随机设计法计算效价、实验误差。可靠性测验应通过,本法可信限率FL(%)不得大于50%.

  2.去垂体大白鼠胫骨法

  本法系通过比较生长激素标准品与供试品对去垂体大白鼠胫骨骨骺板宽度增加的程度,以决定供试品效价的一种方法。

  标准品溶液和供试品溶液的配制同体重法。

  检查法:本法可与去垂体大白鼠体重法同步进行。待体重法实验结束后,取下两腿胫骨,10%甲醛保存,从胫骨近心端顶部中间沿矢状面切开,置10%甲醛中,水洗10分钟后,置丙酮中10分钟,水洗3分钟,2%硝酸银中染色2分钟,水洗后置水中强光照射至变棕黑色,10%硫代硫酸钠固定30秒钟,置80%乙醇中供测量用。测量时沿刨面切1mm左右薄片置显微镜下测量胫骨骨骺板宽度作为反应值。实验结果按“生物检定统计法”(附录ⅩⅠⅤ)中

  的量反应平行线测定随机设计法计算效价、实验误差。可靠性测验应通过,本法1去垂体大白鼠体重法

  本法系通过比较生长激素标准品与供试品对幼龄去垂体大白鼠体重增加的程度,以测定供试品效价的一种方法。

  标准品溶液的配制实验当日,取标准品,按标示效价用含0.1%牛血清白蛋白的0.9%氯化钠溶液,配制成高、低两种浓度的稀释液。一般高浓度稀释液配成每1ml含0.1~0.2IU,低浓度稀释液配成每1ml含0.025~0.05IU,高低两浓度比值(r)一般为1∶0.25,稀释液分装成每天剂量并密封-15℃以下保存,临用时溶化。

  供试品溶液的配制按供试品的标示效价或估计效价,同标准品溶液的配制及保存方法。

  动物取同一来源、品系,出生26~28天,体重60~80g,同一性别、健康的大白鼠,试验前2~3周手术摘除垂体,手术后于清洁级以上动物室饲养使其恢复,备用。

  检查法:取去垂体手术后2~3周、体重变化小于手术前±10%的大白鼠,按体重均匀分成4组,每组至少8只,每只编号并记录体重。分别自颈部皮下注射一种浓度的标准品或供试品溶液0.5ml,每日一次,连续6日。最后一次给药后24小时,处死大鼠,称重,必要时实验结束后可进行尸检,切开蝶鞍区,肉眼检查有无垂体残留,剔除有垂体残存的动物。每只动物给药后体重增加的克数作为反应值。供试品与标准品各剂量组所致反应的平均值应相当,低剂量组应较未给药组体重有明显的增加,高剂量组体重增加不致达极限。实验结果按“生物检定统计法”(附录ⅪⅤ)中的量反应平行线测定随机设计法计算效价、实验误差。可靠性测验应通过,本法可信限率FL(%)不得大于50%。

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