(1)骨髓采集:采集骨髓前数周先进行供者自体循环采血,并达到一定的量,供采集骨髓时补充血容量之用。采集骨髓时对供者行硬膜外麻醉或全身麻醉,在髂前和髂后上棘多点穿刺,在输血的同时,抽取骨髓与血液混合物l000ml左右。所采的单个核细胞(MNC)要求达到3×108/kg(受者体重),收集在加有肝素的组织保养液如1640及TCl99中,通过不锈钢滤网去除凝块及脂肪滴后静脉滴注,缓慢输给患者。
(2)外周血干细胞的采集:外周血中造血干细胞含量较少,仅为骨髓的1%,干细胞采集前需用粒细胞集落刺激因子(G-CSF)进行动员。再用血细胞分离机分离采集供者外周血单个核细胞(MNC)。要求采集的MNC达到3×108/kg(受者体重),CD34+细胞含量达到3×106/kg,CFU-GM达到3×104/kg。足量采集后从静脉输给受者。
(3)脐血采集:应在分娩后结扎脐带移去胎儿娩出胎盘前,于无菌条件下,直接从脐静脉采集,每份脐血量60-100ml左右。由于脐血的干细胞数量受限,脐血移植一般不适合体重大的受者。脐血可通过规范的脐血库长期保存备用。目前卫生行政部门对脐血干细胞的采集、检测和应用有严格的规定。
骨髓血、外周造血干细胞或脐血可在4℃保存72h.加入冷冻保护剂(10%二甲亚砜),通过程控降温,寄放在液氮(-196℃)中可超低温长期保存。