ELISA,即酶联免疫吸附试验(Enzyme-Linked Immunosorbent Assay),是一种广泛应用于临床检验和科研中的生物化学技术。其基本原理是利用抗原与抗体之间的特异性结合反应,并通过酶催化底物显色来定性或定量地检测目标物质。
ELISA主要分为直接法、间接法、夹心法(双抗体夹心法)和竞争法四种类型:
1. 直接法:将待测抗原固定在固相载体上,加入针对该抗原的酶标抗体,经过洗涤去除未结合部分后,再加底物显色。此方法简单快速但灵敏度较低。
2. 间接法:先让待测样本中的特异性抗体与包被于反应板上的已知抗原相结合,然后用酶标记的二抗识别并结合这些一抗,最后通过加入底物使颜色变化来判断结果。这种方式提高了检测敏感性和灵活性。
3. 夹心法(双抗体夹心法):适用于测定含有两个以上相同或不同表位的大分子抗原。首先将一种特异性抗体固定在固相载体上作为捕获抗体,待测样本中的目标抗原与之结合形成复合物;随后加入另一种特异性的酶标记抗体,即检测抗体,它能识别并结合到已经形成的免疫复合物上的另一表位,最终通过底物显色来确定目标抗原的存在及其浓度。
4. 竞争法:当待测物质为小分子或多肽时常用此方法。原理是将已知量的酶标抗原与未知量的非标记抗原竞争性地结合到有限数量的抗体位点上,通过比较两者之间的差异来推算出样品中目标物的含量。
ELISA技术因其操作简便、特异性强、灵敏度高和适用范围广等特点,在临床诊断领域得到了广泛应用。