ELISA(Enzyme-Linked Immunosorbent Assay)即酶联免疫吸附试验,是一种常用的免疫学检测技术。其基本原理是利用抗原与抗体之间的特异性结合反应来定性或定量地检测样本中的特定物质,如蛋白质、激素、病毒抗原等。
ELISA法主要包括以下几个步骤:
1. 包被:将待测的抗原或者已知的抗体固定在固相载体(通常是微孔板)上。
2. 封闭:使用无关蛋白(例如牛血清白蛋白BSA)覆盖未结合位点,以减少非特异性吸附。
3. 加样:向包被好的微孔中加入待测样品,如果样品中含有目标抗原或抗体,则会与固定的成分发生免疫反应形成复合物。
4. 洗涤:去除未结合的物质。
5. 酶标二抗孵育:加入针对特定物种IgG的酶标记抗体(如辣根过氧化物酶HRP),该酶标二抗能特异性地识别并结合到第一步形成的免疫复合物上。
6. 洗涤:再次洗涤以除去未反应的酶标二抗。
7. 显色:加入底物,如果存在酶标记抗体,则会发生化学反应产生颜色变化,通过测定吸光度值来判断样品中目标物质的浓度。
ELISA法具有操作简便、灵敏度高、特异性强等优点,在临床诊断和科学研究中有广泛的应用。