血红蛋白测定的检验原理是什么呢?快来跟着小编了解一下吧!
1.氰化高铁血红蛋白HiCN测定法:除SHb外
ICSH推荐参考方法,具有操作简单、显色快、结果稳定可靠、读取吸光度后可直接定值等优点。致命的弱点是氰化钾(KCN)试剂有剧毒,使用管理不当可造成公害。
氰化高铁血红蛋白测定法操作
(1)直接测定法
①加转化液:试管内加5ml HiCN转化液
②采血与转化:取全血20μl,加到盛有转化液的试管底部,用上清液反复冲洗吸管3次,充分混合,静置5min。
③测定:以符合WH0标准的分光光度计,波长540nm处,光径(比色杯内径)1.000cm,HiCN转化液或蒸馏水调零,测定吸光度(A)。
④计算:根据样本的吸光度(A)直接计算出血红蛋白浓度(g/L)
(A为测定管吸光度,44为毫摩尔消光系数,64458/1000为1mol/L Hb溶液中所含Hb克数,251为稀释倍数。)
(2)HiCN标准液比色法测定
HiCN参考液(50g/L、100g/L、150g/L、200g/L),分别测得540nm处的吸光度,以参考液血红蛋白含量为横坐标,吸光度为纵坐标,绘制标准曲线或求出K值。
①标准曲线绘制和K值计算
②样本吸光度(A)
③通过标准曲线查出样本血红蛋白浓度,或用K值计算,血红蛋白浓度Hb(g/L)=K×A。
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