常用的血清总蛋白测定方法有多种,主要包括:
1. 双缩脲法(Biuret Method):这是最经典的蛋白质定量方法之一。原理是蛋白质分子中的肽键在碱性条件下与铜离子作用形成紫色复合物,颜色的深浅与蛋白质浓度成正比。
2. 凯氏定氮法(Kjeldahl Method):通过测定样品中总氮量来间接计算蛋白质量,但此方法耗时较长且操作复杂,在临床应用上较少使用。
3. 染料结合法 - 考马斯亮蓝G-250染色法(Bradford Assay with Coomassie Brilliant Blue G-250):利用蛋白质与特定染料的结合能力,通过测量吸收光谱的变化来测定蛋白浓度。该方法灵敏度高、特异性好。
4. 紫外分光光度法(UV Spectrophotometry at 280 nm):基于蛋白质分子中酪氨酸和色氨酸残基在紫外区有吸收峰的特性,直接测量吸光度来估算蛋白质量。此方法简单快捷但受其他物质干扰较大。
5. 酚试剂比色法(Lowry Method):结合了双缩脲反应与铜-钼蓝复合物生成过程,灵敏度较高,但由于存在较多影响因素,在实际操作中需严格控制条件。
6. 免疫浊度测定法(Immunoturbidimetric Assay):利用特异性抗体与目标蛋白质形成免疫复合物后引起溶液浑浊程度的变化来进行定量分析。适用于特定蛋白的检测。
以上就是临床上常用的几种血清总蛋白测定方法,每种方法都有其特点和适用范围,在实际工作中可根据需要选择最合适的测定手段。