在酶免疫技术中,常用的酶主要有辣根过氧化物酶(HRP)、碱性磷酸酶(ALP)以及β-半乳糖苷酶。这些酶因其高催化效率、稳定性好、易于纯化和标记等优点而在免疫检测中广泛应用。
1. 辣根过氧化物酶(HRP):是最常用的标记酶之一,具有良好的稳定性和较高的敏感度。它能够与多种底物反应产生颜色变化或发光现象,便于定性或定量分析。在ELISA、Western Blot等实验技术中应用广泛。
2. 碱性磷酸酶(ALP):该酶对pH值的适应范围较广,在碱性环境下活性最强。其底物种类多,如NBT/BCIP可产生蓝色沉淀,适用于组织化学染色;当使用荧光或发光底物时,则可用于高灵敏度检测。
3. β-半乳糖苷酶:此酶主要应用于基因工程领域,特别是在蓝白斑筛选中起到重要作用。此外,在某些特定的免疫测定方法中也作为标记酶使用,如ELISPOT技术等。
这些酶的选择取决于具体的实验需求、底物类型以及预期的结果形式(比如颜色变化、荧光或发光)。在实际操作过程中,还需要考虑成本效益比等因素来确定最合适的酶种类。