中性粒细胞呼吸爆发,也称为中性粒细胞氧化爆发或NADPH氧化酶活性测定,是评价中性粒细胞功能的重要指标之一。它是指在受到刺激时(如细菌、真菌等病原体),中性粒细胞内产生大量活性氧的过程,这对于清除入侵的微生物具有重要作用。
评估中性粒细胞呼吸爆发的方法主要有以下几种:
1. 化学发光法:这是最常用的检测方法之一。通过向中性粒细胞悬液中加入刺激物(如佛波酯PMA、细菌脂多糖LPS等),然后测定细胞产生的活性氧与化学发光底物反应后发出的光强度,从而间接反映呼吸爆发的程度。
2. 流式细胞术:利用荧光探针标记活性氧分子或其代谢产物,在流式细胞仪上检测单个细胞内的荧光信号变化,可以更精确地测定每个中性粒细胞的氧化状态及其分布情况。
3. 电子显微镜技术:通过透射电镜观察经特殊染色处理后的样本,根据超微结构的变化来判断呼吸爆发的情况。这种方法虽然操作复杂且成本较高,但对于研究细胞内部详细变化仍具有重要价值。
4. 酶活性测定法:直接测量NADPH氧化酶的活性水平,间接反映中性粒细胞呼吸爆发的能力。例如,可以通过检测还原型辅酶II(NADPH)转化为氧化型辅酶II(NADP )的速度来评估酶活性。
以上这些方法各有优缺点,在实际应用时可根据实验室条件和研究目的选择合适的方法进行测定。