在免疫检测技术中，间接ELISA（酶联免疫吸附测定）是一种常用的检测方法。其基本原理是利用抗原与抗体之间的特异性结合反应来检测样本中的目标物质。间接ELISA法主要分为以下几个步骤：
1. 包被：首先将已知的抗原固定在固相载体上，例如微孔板的表面。
2. 封闭：使用非特异性蛋白质（如牛血清白蛋白）处理包被后的微孔板，以封闭未结合的位点，防止非特异性结合的发生。
3. 加样：将待测样本加入到微孔板中，如果样本中含有能与固相抗原发生反应的目标抗体，则两者会发生结合。
4. 洗涤：去除未结合或非特异性吸附的物质。
5. 酶标二抗孵育：加入针对目标抗体种属来源的酶标记二抗（例如辣根过氧化物酶标记的山羊抗人IgG），此步骤中，酶标记的二抗与已结合的目标抗体发生反应形成复合物。
6. 洗涤：再次去除未结合或非特异性吸附的物质。
7. 底物显色：加入底物溶液后，酶催化底物产生颜色变化，通过比色法测定吸光度值来判断样品中目标抗体的存在与否及其浓度。

间接ELISA法具有较高的灵敏度和特异性，并且可以检测多种类型的抗体，因此被广泛应用于临床诊断、疾病监测及科学研究等领域。