流式细胞术是一种用于分析和分选单个细胞或其他生物颗粒的技术,它能够同时测量多个不同的参数。这些参数主要包括:
1. 细胞大小:通过前向散射光(FSC)信号来评估,这与细胞的体积有关。
2. 细胞复杂度或内部结构:侧向散射光(SSC)信号可以反映细胞内颗粒物质的多少和分布情况,从而间接指示细胞的复杂程度。
3. 荧光强度:当用特定波长的激光照射样本时,被标记了荧光染料的目标分子会发出荧光。根据不同的荧光素选择不同颜色的检测通道,可以同时测定多种荧光信号,进而识别并定量表达在细胞表面或内部的不同抗原、核酸等生物大分子。
4. 细胞周期:利用DNA特异性染色剂(如PI、DAPI)对细胞进行染色后,可以通过分析每个细胞中DNA含量的变化来研究其处于哪个阶段的细胞周期。
5. 活性氧水平:通过特定荧光探针检测细胞内的活性氧物质浓度变化,以评估氧化应激状态。
6. 细胞凋亡与坏死:采用Annexin V/PI双染法等方法,可区分早期和晚期凋亡以及死亡的细胞。
7. 线粒体膜电位:使用线粒体敏感性荧光探针(如JC-1)来监测线粒体功能状态。
8. 细胞表面标志物表达情况:通过抗体偶联的荧光素标记特定蛋白,可以分析各种免疫细胞亚群的比例及其功能特性。
总之,流式细胞术能够提供关于细胞物理性质、化学成分及生物学行为等多方面的信息,在临床诊断和科学研究中具有广泛的应用价值。