放射免疫技术(Radioimmunoassay, RIA)是一种利用放射性同位素标记抗原或抗体进行定量测定的技术。其基本原理是基于竞争性抑制反应,即已知量的放射性标记抗原与非放射性的待测抗原竞争有限数量的特异性抗体结合位点。当向系统中加入不同浓度的未标记抗原时,它会与标记抗原争夺相同的抗体结合位点,从而减少标记抗原-抗体复合物的数量。通过测定反应体系中游离态和结合态放射性标记物质的比例变化,可以计算出待测样品中的抗原含量。
具体步骤如下:
1. 准备一定量的特异性抗体、已知浓度的放射性标记抗原以及未知浓度的非放射性待测抗原。
2. 将上述成分混合,在适宜条件下孵育一段时间,使抗原与抗体充分结合。
3. 分离游离态和结合态的标记物。通常使用固相吸附法或化学沉淀法等方法实现分离。
4. 测定结合态放射性强度,并根据标准曲线确定待测样品中目标物质的浓度。
由于RIA具有高灵敏度、特异性强等特点,广泛应用于临床诊断、科学研究等领域,特别是对于微量生物活性物质如激素、药物代谢产物及病毒抗原等的检测。