在ELISA(酶联免疫吸附测定)检测中,为了提高检测灵敏度和准确性,常常需要对抗原抗体结合的信号进行放大。这种放大的机制主要依赖于酶标二抗或链霉亲和素-生物素系统等方法来实现。
1. 酶标二抗法:首先用特异性的一抗与待测样品中的目标分子(抗原)结合,然后加入带有特定酶标记的二抗。这个二抗能够识别并结合到一抗上。当底物溶液被添加时,酶会催化底物发生化学反应产生颜色变化或其他可检测的变化,如荧光或发光等。通过测量这些变化的程度可以间接反映出目标分子的存在量。
2. 链霉亲和素-生物素系统:此方法利用了链霉亲和素与生物素之间极高的亲和力。首先将待测抗原固定在板上,并用生物素化的抗体进行孵育,使它们结合形成复合物;接着加入链霉亲和素-酶复合物,由于链霉亲和素能特异性地识别并紧密结合至生物素分子上,因此可以进一步增强信号强度。最后通过添加底物来产生可检测的信号变化。
这两种方法都能有效地放大ELISA中的信号,从而提高检测灵敏度。选择哪种方式取决于具体的实验条件和需求。