抗血清纯化的主要方法有以下几种:
1. 盐析法 这是利用不同蛋白质在一定浓度的中性盐溶液中的溶解度不同,通过调节盐的浓度使目标蛋白沉淀下来的方法。常用的是硫酸铵或硫酸钠。
2. 层析技术 包括离子交换层析、凝胶过滤层析和亲和层析等。其中,亲和层析是利用抗原与抗体之间的特异性结合力进行纯化的一种高效方法,特别适用于从粗制抗血清中提纯特定的抗体。
3. 超滤法 通过半透膜的选择性透过作用,可将分子量较大的免疫球蛋白与其他小分子物质分离出来。此方法操作简便、快速且能较好地保持抗体活性。
4. 密度梯度离心 利用不同蛋白质在密度梯度介质中的沉降速度差异进行分离纯化。
5. 电泳技术 如等电聚焦电泳,根据蛋白质的等电点差异实现分离。
6. 色谱法 包括高效液相色谱(HPLC)和薄层色谱等,可以对经过初步纯化的抗血清样品进一步精制。
以上各种方法各有优缺点,在实际应用中往往需要结合具体情况进行选择或组合使用。