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细菌染色步骤有哪些?

细菌染色是微生物学中一项重要的技术,用于观察和鉴定细菌。最常用的细菌染色方法是革兰氏染色法,其基本步骤如下:
1. 制片 首先在干净的载玻片上滴加一滴生理盐水或蒸馏水,然后用接种环挑取少量待检菌落,在水中均匀涂抹成薄膜。让涂片自然干燥。
2. 固定 将制好的涂片通过火焰上方快速来回移动几次(约3-5次),以加热固定细菌于载玻片上。注意温度不可过高以免破坏细胞结构。
3. 初染 用结晶紫染液覆盖整个样本区域,染色1-2分钟。
4. 水洗 倾斜玻片并轻轻冲洗掉多余的染料,去除表面未结合的色素。
5. 碘化物媒染 加碘液(卢戈氏碘液)于涂膜上作用约1分钟,形成复合物使染色更加稳定。
6. 再次水洗 倾斜玻片并轻轻冲洗掉多余的碘液。
7. 脱色 用95%乙醇或丙酮-酒精混合溶液脱色30秒至1分钟。此步骤对于区分革兰氏阳性菌和阴性菌至关重要:革兰氏阳性菌会保持紫色,而革兰氏阴性菌则会被脱色。
8. 复染 使用番红染液复染约1分钟。这一步是为了使被脱色的革兰氏阴性菌恢复颜色,通常呈现为红色或粉红色。
9. 最终水洗 清除残留的染料,并用吸水纸轻轻吸干载玻片边缘多余的水分。
10. 封片与观察 在涂膜上滴加一滴香柏油后盖上盖玻片,在显微镜下进行观察。根据细菌的颜色和形态特征,可以初步判断其属于革兰氏阳性还是阴性菌群。

以上就是细菌染色的基本步骤,不同实验室可能在具体操作细节上有所差异,但大体流程相似。
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