ELISA(酶联免疫吸附测定)是一种常用的免疫学检测方法,主要用于检测样本中特定抗原或抗体的存在和浓度。其基本原理是利用了抗原与抗体之间的特异性结合反应,并通过酶催化底物显色来放大信号,从而实现对目标分子的定性或定量分析。
ELISA技术主要包括以下几个步骤:
1. 包被:将已知的抗原(直接法)或者抗体(间接法、竞争法等)固定在固相载体表面,如微孔板。
2. 封闭:加入封闭液覆盖未结合的位置,以减少非特异性吸附对结果的影响。
3. 加样:向微孔中加入待测样品,如果样品中含有目标抗原或抗体,则会与包被物质发生特异性结合。
4. 洗涤:去除没有结合的成分以及可能存在的干扰物。
5. 结合酶标二抗:对于间接法ELISA,需要添加能够识别初级抗体并已经标记了酶的二抗;直接法则省略此步骤。
6. 显色反应:加入底物后,在酶的作用下产生颜色变化。根据显色程度的不同可以判断样品中目标分子的含量。
7. 测定:使用分光光度计测定吸光值,从而计算出待测物质的具体浓度。
ELISA技术因其操作简便、灵敏度高、特异性强等特点,在临床诊断和科学研究领域得到了广泛应用。