ELISA,即酶联免疫吸附试验(Enzyme-Linked Immunosorbent Assay),是一种用于检测特定抗原或抗体存在的高灵敏度和特异性的免疫学方法。其基本原理是利用固相载体上的抗原或抗体来捕获待测样本中的相应成分,并通过一系列的结合反应,最终借助酶促底物显色反应来定性或定量地测定目标物质。
ELISA技术主要分为直接法、间接法、夹心法(双抗体夹心法)、竞争法等几种类型。下面简要介绍这四种方法的基本原理:
1. 直接法:将已知的抗原固定在固相载体上,加入待测样本中的特异性抗体使其与固定的抗原结合,再加酶标记的第二抗体识别并结合到第一抗体上形成复合物。最后通过底物显色反应来判断是否存在目标物质。
2. 间接法:首先将已知的抗原固定在固相载体表面,然后加入待测样本中的特异性抗体使其与固定的抗原相结合。之后再用酶标记的第二抗体(针对第一抗体)进行识别和结合。最后通过底物显色反应来检测目标物质。
3. 夹心法:此方法适用于检测大分子量的目标蛋白。首先将一种特定的捕捉抗体固定在固相载体上,然后加入待测样本中的目标抗原使其与固定的抗体相结合。随后再加入另一种针对该抗原不同表位的酶标记抗体形成“夹心”结构。最后通过底物显色反应来检测目标物质。
4. 竞争法:将已知浓度的标准品或对照品和待测样本同时加入含有固定化抗原(或抗体)的孔中,二者竞争性地与固相载体上的位点结合。由于标准品或对照品的量是固定的,因此可以通过比较它们之间结合程度的变化来推算出待测样本中的目标物质浓度。
ELISA技术因其操作简便、灵敏度高、特异性强等特点,在临床诊断、科学研究等领域得到了广泛应用。