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革兰氏染色步骤是什么？

正保医学教育网2025-07-04
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革兰氏染色是一种重要的细菌鉴别方法，其主要步骤包括：
1. 制片：首先将待检细菌涂布在干净的载玻片上，形成均匀的薄层。
2. 固定：通过火焰固定或化学固定法使菌体附着于载玻片上。通常将载玻片轻轻过火2-3次即可完成热固定过程。
3. 初染：滴加结晶紫染液覆盖整个涂片，染色1分钟。
4. 水洗：用蒸馏水冲洗掉多余的染料，时间不宜过长。
5. 碘液媒染：加入碘液处理1分钟，使细菌内的结晶紫与碘形成复合物。
6. 再次水洗：去除表面的碘液。
7. 脱色：使用95%乙醇或丙酮-乙醇混合液脱色30秒至1分钟。此步骤是革兰氏染色的关键，可以区分出革兰阳性菌和阴性菌。
8. 复染：用沙黄复染液或其他对比颜色的染料进行复染约1分钟。
9. 最后水洗：彻底清洗掉残留的染液，并立即吸干水分。

经过上述步骤处理后的涂片，在显微镜下观察，革兰阳性菌呈现紫色，而革兰阴性菌则为红色。
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