分光光度计是一种用于测量物质对不同波长光线吸收程度的仪器。其工作原理基于比尔-朗伯定律,该定律表明当一束平行单色光通过均匀的吸光物质时,溶液的吸光度与溶液中吸光物质浓度及液层厚度成正比。
分光光度计主要由光源、单色器(或滤光片)、样品池和检测器四部分组成。工作流程如下:
1. 光源发出连续波长的光,例如钨灯适用于可见光区,氘灯光适用于紫外光区。
2. 单色器将复合光线分解成单一波长的光,或者使用特定波长的滤光片来选择所需的单色光。
3. 选定波长的单色光穿过装有样品溶液的比色皿或样品池。如果样品中含有能吸收此波长光的分子,则部分光线会被吸收,透过的光线强度会减弱。
4. 检测器接收透过样品后的剩余光线,并将其转换成电信号,再由仪器内部电路处理后显示为吸光度值或其他相关参数。
通过测量不同浓度溶液在特定波长下的吸光度,可以绘制出标准曲线。未知样品的浓度可以通过与已知的标准曲线对比来确定。分光光度计广泛应用于临床检验中,如血液分析、生化检测等。