在显微镜下准确计数红细胞,通常采用血细胞计数板(如Neubauer改良型计数板)进行。具体步骤如下:
1. 准备样品:首先将血液稀释到适当的浓度,一般情况下是用等渗的盐水或者专门的稀释液按一定比例稀释,比如1:200的比例。
2. 加样:使用微量移液器吸取少量稀释后的血样(通常为10微升),然后轻轻滴加至计数板的凹槽中。确保液体完全覆盖计数区域但不要溢出。
3. 覆盖盖玻片:将专用的盖玻片平稳地放在计数板上,避免产生气泡。
4. 显微镜观察:选择合适的放大倍率(通常为10x或20x),找到计数板上的特定区域进行观察。Neubauer改良型计数板上有五个大方格区,每个大格又分为16个小方格。一般选取四个角的大方格和中间的一个大格共5个区域来计数红细胞。
5. 计数:在选定的区域内逐个计数所有可见的红细胞。遵循“左不右、上不算下”的原则,即只计算位于边界线左侧或上方的细胞;若细胞正好落在两条线相交处,则仅计算左上线和右下线上的细胞。
6. 计算浓度:根据所使用的稀释比例及计数板的具体规格,将实际观察到的数量转换成每微升血液中的红细胞数目。例如,如果Neubauer改良型计数板上5个区域共观察到了N个红细胞,并且是按照1:200的比例稀释,则原血样中每微升的红细胞数量为:(N/5)
200 10^4。
7. 数据记录与分析:将计算结果记录下来,必要时进行多次重复实验以提高准确性,并对数据进行统计学处理。
需要注意的是,在整个过程中要严格遵守无菌操作规范,避免污染样本。此外,显微镜的清洁维护也很重要,保证视野清晰干净有助于获得更准确的结果。