生物素-亲和素系统在ELISA(酶联免疫吸附测定)中的应用可以显著提高检测的灵敏度。这是因为生物素与亲和素之间的结合具有极高的特异性和亲合力,比抗原抗体间的相互作用强得多。具体来说,在ELISA中使用该系统时,可以通过以下方式来提升灵敏度:
1. 放大信号:在传统的直接或间接ELISA方法基础上引入生物素-亲和素系统后,可以实现对目标分子的多级放大效应。例如,在捕捉抗体被固定于固相载体上之后,先加入生物素化的检测抗体与待测抗原结合形成复合物;随后再添加链霉亲和素标记的酶(如辣根过氧化物酶),由于每个链霉亲和素分子可以同时结合多个生物素化分子,因此能够显著增加标记酶的数量,从而放大最终底物显色反应产生的信号。
2. 减少非特异性结合:利用高亲合力的生物素-亲和素相互作用,可以在洗涤步骤中更有效地去除未结合或弱结合的试剂,减少背景干扰,提高信噪比。这有助于检测低浓度的目标抗原或抗体,使得ELISA具有更高的灵敏度。
3. 增强稳定性:由于链霉亲和素与生物素之间的结合非常稳定,在实验操作过程中不易受到温度、pH值变化等因素的影响,保证了整个系统的可靠性和重复性。
综上所述,通过引入生物素-亲和素系统,ELISA技术不仅提高了检测灵敏度,还增强了结果的准确性和稳定性。