在分离免疫细胞时，为了保持其活性，需要注意以下几个方面：
1. 操作速度：整个操作过程应尽量快速完成。因为细胞暴露于非生理环境的时间越长，其生存能力下降的风险就越大。
2. 温度控制：维持适宜的温度对于保护细胞活力至关重要。通常情况下，操作应在接近人体体温（约37°C）或室温下进行，避免过冷或过热对细胞造成伤害。
3. 无菌条件：确保所有使用的试剂和器材都是无菌的，并在超净工作台中操作以防止污染，这有助于减少细菌、真菌等微生物对免疫细胞的影响。
4. 适宜的pH值与渗透压：使用平衡盐溶液（如PBS）来稀释样本时需保证其具有合适的pH值和渗透压，以免影响细胞膜结构及功能。
5. 轻柔处理：在分离过程中应轻柔地混匀液体，并尽量减少离心力的作用时间。过高的离心速度或长时间的离心可能会损伤细胞表面结构，导致活性降低。
6. 选择合适的分离方法：根据实验目的和所需细胞类型的不同，可以选择不同的分离技术（如密度梯度离心、磁珠分选等），以获得更高纯度的目标细胞群，并尽量减少对其他非目标细胞的干扰。
7. 添加保护性添加剂：在某些情况下，可以在培养基中加入一些能够提供额外营养支持或抗凋亡作用的小分子物质，如血清白蛋白或其他生长因子，有助于提高分离后免疫细胞的存活率和功能状态。

通过上述措施可以有效地保持分离过程中免疫细胞的活性。