放射免疫测定(Radioimmunoassay,RIA)是一种高灵敏度的体外分析技术,主要用于检测微量的抗原或抗体。其基本原理是利用放射性同位素标记的抗原与未标记的待测抗原竞争结合有限数量的特异性抗体分子,形成抗原-抗体复合物。通过测量放射活性的变化来确定样本中待测物质的浓度。
具体步骤如下:
1. 准备一定量的特异性抗体和过量的放射性同位素标记的抗原。
2. 将待检测样品加入到反应体系中,未标记的抗原与标记的抗原竞争结合有限数量的抗体位点。
3. 经过一段时间孵育后,形成抗原-抗体复合物。由于抗体的数量是固定的,当样品中的未标记抗原含量增加时,它会取代一部分标记抗原与抗体结合,导致游离状态下的标记抗原增多。
4. 通过离心或过滤等方法将形成的抗原-抗体复合物从游离的标记抗原中分离出来,并测定其放射性强度。
5. 根据标准曲线计算出样品中的待测物质浓度。标准曲线是通过已知浓度的标准品与相同条件下的反应体系进行比较而建立起来的。
由于RIA具有高灵敏度、特异性好等特点,在临床医学中被广泛应用于激素、药物、病毒抗体等多种微量生物活性物质的检测。但是,因为涉及到放射性物质的操作和处理,需要严格遵守安全规范,并且在专业实验室条件下完成。