在制备基因工程抗体时,常用的载体主要包括质粒DNA、噬菌体展示系统、腺病毒载体、逆转录病毒载体和慢病毒载体等。这些载体各有特点,在不同的应用场景中发挥着重要作用。
1. 质粒DNA:是最简单的克隆载体,主要用于将目标基因导入原核细胞如大肠杆菌中进行表达。质粒具有操作简便、成本低廉的优点,但在哺乳动物细胞中的转染效率较低。
2. 噬菌体展示系统:通过将抗体片段的编码序列插入到噬菌体表面蛋白的编码区,使抗体以融合蛋白的形式展示在噬菌体表面。这种方法可以用于筛选高亲和力的单克隆抗体,特别适合于从大型库中快速筛选特异性结合分子。
3. 腺病毒载体:是一种常用的真核表达系统,能够高效地将外源基因导入多种类型的哺乳动物细胞内,并且具有较高的转导效率。腺病毒载体适用于需要在较短时间内观察瞬时表达效果的实验研究。
4. 逆转录病毒载体和慢病毒载体:这两类载体都是通过RNA介导的方式将目标基因整合到宿主细胞的染色体DNA中,实现长期稳定表达。其中,慢病毒载体相比逆转录病毒载体具有更广泛的细胞类型适用范围,并且能够转导非分裂期细胞。
选择合适的载体需要根据实验目的、目标细胞类型等因素综合考虑。