免疫测定主要依赖的是抗原与抗体之间的特异性结合反应。这种结合具有高度的选择性和亲和力,是免疫测定的基础。根据这一基本原理,可以进一步细分为几种具体的反应类型:
1. 直接法:在直接法中,标记的抗体(如酶、荧光素或放射性同位素等)与待测抗原直接结合。当样品中含有目标抗原时,标记物就会随同抗体一起附着到抗原上形成复合体,通过检测标记物的变化来判断目标物质的存在与否及其浓度。
2. 间接法:间接法则是在第一步使用未标记的一级抗体(特异性识别待测抗原)与样本中的抗原结合后,再加入二级抗体。这个二级抗体是针对一级抗体的,并且被预先标上了某种可检测的标签。通过观察二级抗体上标记物的变化来反映目标抗原的情况。
3. 竞争法:竞争法适用于测定小分子物质。在该方法中,已知量的标记抗原和未知浓度的未标记待测抗原共同与有限数量的特异性抗体结合位点竞争。根据最终形成的标记抗原-抗体复合物的数量变化来推算出样品中的抗原含量。
4. 捕获法:捕获法主要用于检测双表位或多表位的大分子物质,如IgM、IgG等免疫球蛋白。首先利用一种特异性抗体固定在固相载体上作为“捕获”抗体,将待测物从混合液中分离出来;然后再加入另一种针对不同抗原决定簇的标记抗体进行检测。
以上就是免疫测定所依赖的主要反应原理,每种方法都有其特定的应用场景和优势。