在进行厌氧菌分离时，需要特别关注以下几个条件以确保实验的成功和准确性：
1. 无氧环境：这是最基本也是最重要的条件。因为厌氧菌是在没有氧气的环境中生长的微生物，所以必须提供一个完全不含游离氧或溶解氧的环境来促进它们的生长。常用的无氧发生系统包括厌氧罐、厌氧手套箱等。
2. 厌氧培养基：选择适合特定类型厌氧菌生长的培养基非常重要。这些培养基通常含有还原剂，如焦亚硫酸钠或者刃天青，能够帮助消耗掉微量氧气，并维持低氧化还原电位，有利于厌氧菌的生存和繁殖。
3. 温度控制：不同种类的厌氧菌对温度的要求可能有所不同。一般情况下，大多数人体来源的病原性厌氧菌在35-37°C下生长最佳。确保培养箱内温度稳定且符合目标菌株的需求是十分重要的。
4. 湿度调节：较高的湿度有助于保持培养基表面湿润，促进微生物的正常代谢活动。通常需要将湿度维持在90%以上。
5. pH值管理：厌氧菌对pH值的变化比较敏感，不同的厌氧菌有不同的最适pH范围。因此，在准备培养基时应适当调整其酸碱度，以满足特定菌种的需求。
6. 营养成分补充：为了促进某些特殊厌氧菌的生长，可能需要向培养基中添加额外的营养物质，如血红蛋白、维生素B12等。
7. 操作速度与技巧：在处理样本及接种过程中应尽量快速完成，并减少暴露于空气中时间，避免引入氧气污染。
8. 严格无菌操作：整个实验过程都需要严格执行无菌技术，防止其他微生物的污染影响结果判断。