酶法测定的基本原理是利用酶对特定底物的高度专一性催化作用，通过测定酶促反应过程中产物生成量或底物消耗量的变化来间接反映待测物质的浓度。酶法测定分为两大类：直接酶法和间接酶法。
1. 直接酶法：适用于检测那些能够作为酶的直接底物或者产物的物质。例如，利用己糖激酶测定葡萄糖时，葡萄糖被特异性地转化为6-磷酸葡萄糖，此过程伴随有NAD 还原为NADH的变化，可以通过监测340nm处吸光度的增加来计算出样品中葡萄糖的浓度。
2. 间接酶法：对于那些不能直接参与酶促反应的物质，则需要通过一系列生化反应将其转化为可以被特定酶作用的形式。比如测定胆固醇时，首先使用酯酶将胆固醇酯水解为游离胆固醇和脂肪酸，然后用胆固醇氧化酶催化游离胆固醇生成Δ4-雄烯二酮和过氧化氢，最后利用过氧化物酶与色原性底物反应产生颜色变化，根据吸光度的变化来测定样品中的总胆固醇含量。
酶法测定具有灵敏度高、特异性强、操作简便等优点，在临床化学检测中广泛应用。它可以用于多种生化指标的测定，如血糖、血脂（包括总胆固醇、甘油三酯）、尿酸、肌酐、转氨酶活性等重要代谢产物和酶类物质的浓度测量。
