在杂交瘤细胞筛选过程中，常用的选择性培养基是HAT培养基。HAT培养基是在基础培养基中添加了次黄嘌呤（Hypoxanthine）、氨基蝶呤（Aminopterin）和胸腺嘧啶核苷（Thymidine）三种成分。这种培养基的作用机制是：氨基蝶呤能够抑制二氢叶酸还原酶的活性，从而阻止细胞从头合成DNA的过程；而次黄嘌呤和胸腺嘧啶则为细胞提供了一条补救途径，即通过利用这些外源性核苷酸来维持DNA的合成。正常小鼠脾细胞因无法长期依赖此补救途径生存而逐渐死亡，但融合后的杂交瘤细胞由于携带了骨髓瘤细胞的二氢叶酸还原酶基因缺陷以外的所有遗传信息，可以无限增殖并分泌单克隆抗体。因此，在HAT培养基中只有成功融合的杂交瘤细胞才能存活下来，并被筛选出来用于后续实验。
