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生物学测定中,何为ELISA法原理?

ELISA(酶联免疫吸附试验)是一种常用的生物学测定方法,主要用于检测和定量样本中的抗原或抗体。其基本原理是利用了抗原与抗体之间高度特异性的结合反应,并通过酶催化底物显色来放大信号,从而实现对目标物质的高灵敏度检测。

ELISA法通常包括以下几个步骤:
1. 包被:将已知的抗原或抗体固定在固相载体上(如微孔板),这个过程称为包被。
2. 封闭:为了防止非特异性结合,在包被后的微孔中加入封闭液,以覆盖所有未被占有的活性位点。
3. 加样:向微孔内加入待测样本,如果样本中含有目标抗原或抗体,则会与固相上的捕获分子发生特异性结合。
4. 洗涤:去除未结合的物质和杂质,保留特异性结合复合物。
5. 酶标二抗孵育:加入酶标记的二抗,该抗体能与第一步形成的免疫复合物相结合。常用的酶有辣根过氧化物酶(HRP)等。
6. 再次洗涤:去除未结合的酶标二抗。
7. 显色反应:加入底物溶液后,在酶的作用下产生颜色变化,通过比色法测定吸光度值来判断结果。

根据不同的检测目的和设计方式,ELISA可以分为直接法、间接法、竞争法等多种类型。每种方法都有其特点及适用范围,选择合适的方法对于提高实验效率至关重要。
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