在杂交瘤细胞筛选过程中，HAT选择培养基的主要作用是通过其成分来抑制未融合的骨髓瘤细胞和非生产性融合细胞的生长，从而确保只有成功产生目标单克隆抗体的杂交瘤细胞能够生存并增殖。HAT培养基中的H、A、T分别代表次黄嘌呤（Hypoxanthine）、氨基蝶呤（Aminopterin）和胸腺嘧啶核苷（Thymidine）。其中，氨基蝶呤可以阻断DNA合成的两条主要途径——从头合成途径和补救合成途径。未融合的骨髓瘤细胞由于缺乏次黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖转移酶（HGPRT），无法通过补救途径合成DNA，在加入氨基蝶呤后，它们也无法使用从头合成途径，因此无法生存。而杂交瘤细胞因为继承了脾细胞中的HGPRT酶活性，可以利用次黄嘌呤和胸腺嘧啶核苷通过补救合成途径来合成DNA，从而在HAT培养基中存活并增殖。这样就能有效地筛选出能够产生特定单克隆抗体的杂交瘤细胞。
