抗血清纯化的主要目的是去除非特异性抗体、杂蛋白以及其他杂质,提高目标抗体的浓度和纯度,从而增强其在诊断或研究中的特异性和效价。通过纯化可以减少背景干扰,提高检测的灵敏度和准确性。
主要方法有以下几种:
1. 盐析法:利用不同蛋白质在特定盐浓度下溶解度不同的原理进行分离。常用的是硫酸铵沉淀法,能够有效去除部分杂蛋白。
2. 层析技术:包括离子交换层析、凝胶过滤层析、亲和层析等。
- 离子交换层析是基于蛋白质表面电荷差异实现分离的;
- 凝胶过滤层析则根据分子大小不同来分离开目标抗体与小分子物质或大分子复合物;
- 亲和层析利用抗原-抗体之间的特异性结合力,是最常用也是最有效的纯化方法之一。
3. 超滤法:通过膜分离技术,在压力作用下使小分子溶质透过半透膜而大分子抗体被截留下来,达到浓缩和初步纯化的目的。
4. 电泳技术:如等电聚焦电泳、SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)等,依据蛋白质的电荷性质或分子量大小进行分离。
5. 其他方法还包括有机溶剂沉淀法、密度梯度离心法等。每种方法都有其特点和适用范围,在实际操作中往往需要根据具体情况选择合适的方法或者组合使用多种技术以达到最佳纯化效果。