常用的免疫原纯化方法包括以下几种:
1. 盐析法 通过改变溶液中盐离子浓度,使得蛋白质等分子因溶解度下降而沉淀,从而实现分离。常用的是硫酸铵分级盐析。
2. 层析技术 包括凝胶过滤层析、离子交换层析和亲和层析。凝胶过滤层析根据分子大小不同进行分离;离子交换层析利用目标蛋白带电性质差异进行纯化;亲和层析是基于特定配基与靶分子之间的高选择性结合,如抗体-抗原反应。
3. 超速离心法 利用高速旋转产生的强大离心力使混合物中不同密度的物质分开。适用于分离细胞器、病毒颗粒等大分子复合体或颗粒状结构。
4. 电泳技术 主要有琼脂糖凝胶电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)。通过在电场作用下,根据分子大小及所带电荷的不同来实现蛋白质的分离纯化。
5. 高效液相色谱法(HPLC) 该方法结合了层析技术和高压泵送系统,可以实现快速高效的分离。特别适合于微量样品和高纯度要求的情况。
6. 免疫亲和技术 利用特异性抗体与目标抗原之间的相互作用进行捕获和纯化。此法具有高度专一性和高效性,在制备单克隆或多克隆抗体时尤为常用。
这些方法各有特点,实际操作中通常需要结合使用多种技术以达到最佳的纯化效果。