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免疫原制备有哪些方法?

免疫原制备是免疫学研究和相关检测技术的基础,以下介绍几种常见的免疫原制备方法。

对于蛋白质抗原的制备,最常用的是组织和细胞抗原的制备。首先要将组织或细胞破碎,对于质地坚硬的组织,可采用研磨法,将组织剪碎后在研钵中研磨成匀浆;也可使用组织匀浆器,通过高速旋转的刀片将组织细胞破碎。破碎后的细胞悬液可采用反复冻融法,利用细胞内冰晶的形成和融化使细胞膜破裂,释放出抗原。之后,通过低速离心去除组织残渣,再用高速离心或超滤等方法进一步分离和纯化抗原。对于细菌等微生物抗原,可采用物理方法如超声波破碎,利用超声波的空化效应破坏细菌细胞壁;也可用化学方法,如用酚、氯仿等试剂处理,使细菌裂解。得到的抗原粗提物还需经过离子交换层析、亲和层析等方法进行纯化。

对于多肽抗原的制备,化学合成法是常用手段。依据已知的氨基酸序列,通过逐步合成的方式将氨基酸连接成多肽。这种方法可以精确控制多肽的长度和氨基酸组成,但合成的多肽分子量较小,免疫原性弱,通常需要与载体蛋白如牛血清白蛋白、钥孔戚血蓝蛋白等进行偶联,以增强其免疫原性。偶联方法有戊二醛法、碳化二亚胺法等,戊二醛能使多肽和载体蛋白上的氨基通过共价键连接起来;碳化二亚胺则可促进羧基和氨基之间形成肽键。

多糖抗原的制备,一般先从含有多糖的生物材料中提取,可采用水提醇沉法,利用多糖在水中溶解、在高浓度乙醇中沉淀的特性进行提取。提取后的多糖还需去除杂质,如蛋白质、核酸等,可采用 Sevag 法去除蛋白质,通过氯仿 - 正丁醇混合液使蛋白质变性沉淀。经过这些处理后,多糖抗原还可进行分级纯化,如凝胶过滤层析等,以获得纯度较高的多糖免疫原。

此外,基因工程制备免疫原近年来也得到广泛应用。先从生物体中获取编码目的抗原的基因,将其克隆到合适的表达载体上,然后导入宿主细胞如大肠杆菌、酵母细胞等进行表达。表达后的抗原需要进行分离和纯化,根据抗原的特性选择合适的纯化方法
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