生物素 - 亲和素系统(BAS)在临床
检验技师所涉及的抗原检测中是一种极为重要的技术手段,其测抗原的原理基于生物素与亲和素之间具有高度亲和力这一特性。
生物素是一种小分子维生素,它可以很容易地与抗体、抗原等生物大分子结合,而且在结合后不会影响这些生物大分子的生物学活性。亲和素则是一种糖蛋白,每个亲和素分子能结合4个生物素分子,它们之间的结合具有高度的特异性和稳定性,亲和力极高,其解离常数达到10⁻¹⁵mol/L。
在检测抗原时,通常采用以下几种常见模式。一种是双抗体夹心法,首先将已知抗体标记上生物素,制成生物素化抗体。同时,将亲和素标记上可检测的物质,如酶、荧光素等。当含有抗原的标本加入到包被有捕获抗体的固相载体上时,抗原会与捕获抗体结合。接着加入生物素化抗体,它会与已结合在固相载体上的抗原结合,形成抗体 - 抗原 - 生物素化抗体复合物。随后加入标记亲和素,由于亲和素与生物素之间的高亲和力,标记亲和素会与生物素化抗体上的生物素结合。最后通过检测标记物的信号强度,就可以对标本中的抗原进行定量或定性分析。
另一种是亲和素 - 生物素化酶复合物技术(ABC法),先将亲和素与酶标生物素按一定比例混合,形成亲和素 - 生物素化酶复合物(ABC)。在抗原检测中,标本中的抗原与固相载体上的抗体结合后,加入生物素化抗体,然后再加入ABC复合物。ABC复合物中的亲和素会与生物素化抗体上的生物素结合,通过检测酶催化底物产生的颜色变化等信号,来确定抗原的存在和含量。
生物素 - 亲和素系统还可以通过多级放大效应来提高检测的灵敏度。因为一个抗原分子可以结合多个生物素化抗体,而每个生物素化抗体又能结合多个标记亲和素,这样就使得检测信号得到显著放大,能够检测到极微量的抗原。这种高灵敏度和特异性使得生物素 - 亲和素系统在临床检验中广泛应用于各种抗原的检测,如肿瘤标志物、病原体抗原等,为疾病的诊断、治疗监测