酶免疫技术是将抗原抗体反应的特异性和酶的高效催化作用相结合的一种免疫检测技术。根据抗原抗体反应后是否需要分离结合的和游离的酶标记物,酶免疫技术可分为均相酶免疫测定和异相酶免疫测定两大类,以下为你详细介绍。
均相酶免疫测定主要用于小分子激素、药物等的测定。其特点是抗原抗体反应后,结合的和游离的酶标记物在活性上有差异,不需要进行分离就可直接测定标记酶的活性变化来推算出被测物质的含量。例如酶增强免疫测定技术(EMIT),它是最早取得实际应用的均相酶免疫测定方法,原理是半抗原与酶结合成酶标半抗原,当它与相应抗体结合后,酶的活性就受到抑制。在测定标本中半抗原时,标本中的半抗原和酶标半抗原竞争与抗体结合,通过检测酶活性的变化来计算标本中半抗原的含量。
异相酶免疫测定是目前应用更为广泛的一类酶免疫技术。该方法需要将结合的和游离的酶标记物分离后才能测定。它又可分为固相酶免疫测定和液相酶免疫测定。固相酶免疫测定是将抗原或抗体吸附在固相载体表面,常用的固相载体有聚苯乙烯微孔板等。其中,酶联免疫吸附试验(ELISA)是最典型的固相酶免疫测定方法,包括双抗体夹心法、间接法、竞争法等多种类型。双抗体夹心法用于检测大分子抗原,先将特异性抗体包被在固相载体上,加入待测标本,标本中的抗原与包被抗体结合,再加入酶标记的特异性抗体,形成抗体 - 抗原 - 酶标抗体复合物,最后加入底物,根据底物显色的程度来测定抗原的含量。间接法主要用于检测抗体,用已知抗原包被固相载体,加入待测血清标本,若血清中有相应抗体,则与包被抗原结合,再加入酶标记的抗人免疫球蛋白抗体,最后加底物显色。竞争法可用于测定抗原或抗体,以测定抗原为例,将已知抗体包被在固相载体上,同时加入待测抗原和酶标抗原,二者竞争与固相抗体结合,结合于固相的酶标抗原量与待测抗原含量呈反比,通过检测酶活性来计算待测抗原的含量。
液相酶免疫测定是将抗原抗体