分离厌氧菌时需要注意多个方面，以确保能够成功获得目标厌氧菌。

首先是标本的采集，这是分离厌氧菌的第一步，也是关键的基础。标本采集过程必须严格无菌操作，防止标本被正常菌群污染。要避免接触空气，因为厌氧菌对氧气敏感，暴露在空气中会影响其存活。不同部位的标本采集方法有所不同，比如血液标本应在严格消毒后从静脉抽取；深部脓肿标本需用无菌注射器抽取脓汁，尽量避免接触空气；痰液标本应留取深部咳出的痰液。采集后的标本应立即送检，最好在 30 分钟内送达实验室，如果不能及时送检，需将标本保存在厌氧环境中，如使用专门的厌氧运输培养基。

在培养环境方面，要创造严格的厌氧条件。常用的厌氧培养方法有厌氧罐法、厌氧袋法和厌氧手套箱法等。厌氧罐法是利用化学方法除去罐内的氧气，形成厌氧环境；厌氧袋法是将培养物放入特制的塑料袋中，通过袋内的化学反应去除氧气；厌氧手套箱法能提供一个完全密闭的厌氧环境，操作更加方便和准确。培养环境的温度和气体成分也需要严格控制，一般厌氧菌培养的温度为 35 - 37℃，气体成分通常为氮气、氢气和二氧化碳的混合气体，以模拟厌氧菌在体内的生存环境。

培养基的选择也至关重要。应选择营养丰富且含有还原剂的培养基，以降低培养基中的氧化还原电位，利于厌氧菌的生长。常用的培养基有硫乙醇酸盐肉汤、庖肉培养基等。同时，要注意培养基的新鲜度，因为陈旧的培养基可能会吸收空气中的氧气，影响厌氧环境。

在操作过程中，所有的操作都应在无氧条件下进行。接种标本时要迅速，避免标本长时间暴露在空气中。培养过程中要定期观察培养物的生长情况，但观察时也要尽量减少培养物与空气的接触时间。

此外，质量控制也不可忽视。每次培养都应设置阳性对照和阴性对照，以确保培养条件和操作过程的准确性。阳性对照可使用已知的厌氧菌菌株，阴性对照则不接种标本，只加入培养基，观察是否有杂菌生长。

综上所述，分离厌氧菌需要从标本采集、培养环境、培养基选择、操作过程和质量控制等多个方面进行严格把控，才能提高厌氧菌的分离成功率。