方法名称： 灵芝子珍珠口服液—腺苷的测定—高效液相色谱法

应用范围： 本方法采用高效液相色谱法测定灵芝子珍珠口服液中腺苷的含量。

本方法适用于灵芝子珍珠口服液。

方法原理： 取供试品加甲醇，超声处理，放置待沉淀完全，滤过，取许滤液蒸干，残渣加水溶解，以水饱和的正丁醇提取，正丁醇提取液蒸干，残渣加50%甲醇溶解并定容，摇匀，作为供试品溶液。注入高效液相色谱仪，以紫外检测器检测，检测波长为260nm，记录腺苷的响应值，计算其含量。

试剂： 1. 甲醇

2. 正丁醇

仪器设备： 1 仪器

1.1 高效液相色谱仪

1.2 色谱柱

Hypersil C18 (250 ×4.6mm, 5μm)。

1.3紫外检测器

2 色谱条件

2.1 流动相： 甲醇 磷酸盐缓冲液（pH 6.5） = 10 1

2.3 柱温：30℃

2.4 检测波长：260nm

2.5 流速：1.0mL/min

试样制备： 1. 对照品溶液的制备

精密称取腺苷对照品适量，加甲醇配制成1mL含40μg的对照品溶液。

2. 供试品溶液的制备

取供试品20mL置100mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀超声处理5分钟，放置待沉淀完全，滤过，取许滤液50mL蒸干，残渣加水20mL溶解，以水饱和的正丁醇提取4次，合并正丁醇提取液蒸干，残渣加50%甲醇溶解并定容至5mL，摇匀，作为供试品溶液。

注：“精密称取”系指称取重量应准确至所取重量的千分之一。“精密量取”系指量取体积的准确度应符合国家标准中对该体积移液管的精度要求。

操作步骤： 1. 标准曲线的绘制

精密吸取上述对照品溶液2.0、4.0、6.0、8.0、10.0μL注入高效液相色谱仪进行色谱分离，用紫外检测器检测器，于260nm检测腺苷的吸收值，以腺苷的进样量对其峰面积绘制标准曲线，进行线性回归，得到回归方程。

2. 供试品的测定

精密吸取上述供试品溶液10μL，注入高效液相色谱仪，以紫外检测器检测，检测波长为260nm，记录腺苷的响应值，计算其含量。