通过体内外实验，探讨健脾丸的抗肝癌作用，并提示其可能的作用机制，为该方治疗肝癌提供理论依据，并树立中医肝癌“本”是“脾虚”的观点. 方法：1 体外实验：运用中药血清药理学原理和方法，制备健脾丸含药血清。采用四氮唑盐（MTT）法检测不同浓度健脾丸含药血清对人肝癌细胞SMMC-7721作用24h、48h、72h增殖抑制作用的影响。应用流式细胞技术(FCM）检测不同浓度健脾丸含药血清对人肝癌细胞SMMC-7721作用72h后细胞凋亡率和细胞周期，及细胞bcl-2和bax基因蛋白表达。2 体内实验：取60只昆明种小鼠，无菌条件下将小鼠肝癌细胞H22腹水瘤细胞接种到小鼠右腋皮下，0.2ml/只（2×10<'5>个细胞）。动物随机分为5组，每组12只，化疗（5-氟尿嘧啶）组每天腹腔注射0.2ml/只，即0.5mg/只；中药低、中、高剂量组分别给予0.302g/ml,0.604g/ml，1.208g/ml灌胃，0.4ml/只；阴性对照组每日灌服生理盐水0.4 ml/只。每日灌胃一次，连续给药10天，于次日处死，剥离瘤组织，称重，计算抑瘤率。取脾脏称重，计算脾指数。采用流式细胞技术（FCM）检测各组瘤组织细胞凋亡率和细胞周期，及细胞bcl-2和bax基因蛋白表达。采用免疫组化法观察不同浓度瘤组织细胞形态，及bcl-2和bax基因蛋白表达情况。结果 ：1 体外实验结果 1．1健脾丸含药血清对肝癌细胞SMMC-7721作用24小时后，低、中、高剂量组细胞抑制率分别为：7.28%、11.44%、26.14%，与阴性对照组相比能显著抑制肝癌细胞SMMC-7721的生长（P<0.05）。作用48小时后，低、中、高剂量细胞凋亡抑制率分别为：15.67%、20.90%、33.47%，与阴性对照组相比能显著抑制肝癌细胞SMMC-7721的生长（P<0.05）。作用72小时后，低、中、高剂量细胞凋亡抑制率分别为：17.55%、25.47%、34.29%，与阴性对照组相比能显著抑制肝癌细胞SMMC-7721的生长（P<0.05）。并且中药对肝癌细胞SMMC-7721的生长抑制作用呈剂量时间依赖性。本实验结果显示，在一定浓度范围内中药健脾丸能抑制肝癌细胞SMMC-7721的生长。1．2健脾丸含药血清低、中、高剂量组作用于肝癌细胞SMMC-772172h后，G<,0>/G<,1>；期细胞比例分别为：58.800%、62.600%、67.667%；阴性对照组G<,0>/G<,1>；期细胞比例为：50.700%，各中药组与其相比均有显著差异（P<0.05）。S期细胞比例分别为：34.167%、24.767%、19.633%；阴性对照组S期细胞比例为：35.933%，各中药组与其相比均无显著差异（P>0.05）。低、中、高剂量组凋亡率分别为：6.985%、7.615%、8.883%，阴性对照组凋亡率5.688%，各中药组与其相比均有显著差异（P<0.05）。且细胞凋亡率随中药健脾丸剂量增加而升高。1.3流式细胞仪定量分析，结果显示：健脾丸含药血清低、中、高剂量组细胞bcl-2基因蛋白的荧光指数（FI）分别为1.059±0.0069、1.0779±0.0053、1.0422±0.0431，阴性对照组为1.1814±0.0035，各实验组与阴性对照组相比均有显著差异（P<0.05），且随健脾丸含药剂量增加蛋白表达呈降低趋势。bax基因蛋白的荧光指数（FI）分别为1.086±0.0338、1.2024±0.0112、1.2561±0.0148，阴性对照组为1.0392±0.0208，各组与阴性对照组相比均有显著差异（P<0.05），且随健脾丸含药剂量增加bax蛋白表达呈增加趋势。2 体内实验结果 2．1健脾丸低、中、高组对H22移植瘤具有明显抑制作用，各组抑瘤率分别为19.62%，39.71%，48.74%，与阴性对照组相比均有显著差异（P<0.01），并呈剂量依赖性。化疗组抑制率为52.76%，健脾丸高剂量组与之相比无显著差异（P>0.01）。2．2健脾丸低、中、高剂量组荷瘤小鼠的脾指数分别为：8.038±0.9318、9.778±0.8659、11.584±1.4685，化疗组脾指数为：5.278±0.4226，与化疗组相比有明显差异（P<0.01）。2．3低、中、高剂量组瘤组织细胞经流式分析仪检测后，G<,0>/G<,1>；期细胞比例增加，分别为66.667%、76.100%、81.633%，阴性对照组为：58.400%，与对照组相比均有显著性差异（P<0.05）。低、中、高剂量组肿瘤细胞凋亡率分别为：22.16%、28.42%、37.94%，阴性对照组为：9.660%；与阴性对照组相比均有显著性差异（P<0.05）。5．FU组细胞凋亡率为47.71%，健脾丸高剂量组低于阳性对照组（P<0.05）。2．4健脾丸低、中、高剂量组，瘤组织细胞bcl-2基因蛋白的荧光指数（FI）分别为1.2049±0.0077、1.1423±0.0054、1.0859±0.0173，阴性对照组为1.2454±0.0052，5-FU组为1.0420±0.0682；各实验组与阴性对照组相比均有显著差异（P<0.01），且随健脾丸含药剂量增加蛋白表达而降低。bax基因蛋白的荧光指数（FI）分别为1.1559±0.0121、1.2396±0.0109、1.2989±0.0119，阴性对照组为1.0349±0.0190，5-FU组为1.261.1±0.0855；各组与阴性对照组相比均有显著差异（P<0.01），且随健脾丸剂量增加bax蛋白表达而增加。2．5免疫组化检测中，因样本含量较少不足以进行统计学分析，但经组织形态学分析，中药低、中、高剂量组细胞浆中出现棕黄色颗粒说明bcl-2基因蛋白表达阳性，且可看到随中药剂量增加bcl-2表达逐渐减弱。中药低、中、高剂量组细胞浆中亦出现棕黄色颗粒说明bax基因蛋白表达阳性，且随中药剂量增加bax表达逐渐增强。以上基因蛋白表达趋势与流式定量分析所得结果相符。结论 ：1 健脾丸可抑制肝癌细胞的生长，与对照组比，各浓度组在24小时、48小时、72小时均能显著抑制肝癌细胞SMMC-7721的生长。并且中药的生长抑制作用呈剂量时间依赖性。本实验结果显示，在一定浓度范围内中药健脾丸能抑制肿瘤细胞的生长。2 本实验显示：健脾丸低、中、高剂量组作用于肿瘤细胞后，G<,0>/G<,1>；期细胞比例增加，S期细胞比例减少，提示可将细胞阻滞于G<,0>/G<,1>；期，同时肿瘤细胞凋亡率也增加，与对照组相比有显著差异。且中药的凋亡率呈剂量依赖性。3 本实验中，健脾丸低、中、高剂量组，bcl-2基因蛋白的表达随剂量增加而降低，而bax基因蛋白的表达随剂量增加而增加。提示：健脾丸可能通过降低凋亡抑制基因bcl-2表达，增加促凋亡基因bax表达而发挥抗肝癌作用。4 体内实验表明：中药低、中、高剂量组与化疗组相比均能明显提高荷瘤小鼠脾指数，与化疗组相比有显著差异。说明健脾丸可能提高荷瘤小鼠机体免疫力。5 中医健脾丸是治疗脾虚的代表方剂，具有健脾消食，化湿除热的作用，本实验说明：健脾丸对肝癌细胞具有一定抑制作用，一定程度上支持中医肝癌“本”是“脾虚”的观点。