方法名称：

维生素B6的测定—高效液相色谱法

应用范围：

本方法采用高效液相色谱法测定维生素B6（C8H10NO5P）的含量。

本方法适用于维生素B6。

方法原理：

供试品制成流动相溶液，进入高效液相色谱仪进行色谱分离，用紫外吸收检测器，于波长291nm处检测维生素B6吸收值，计算出其含量。

试剂：

1. 甲醇

2. 0.04%戊烷磺酸钠溶液（用冰醋酸调节pH值至3.0）

3. 冰醋酸

仪器设备：

1. 仪器

1.1 高效液相色谱仪

1.2 色谱柱

十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，理论塔板数按维生素B6峰计算不低于4000。

1.3 紫外吸收检测器

2. 色谱条件

2.1 流动相：0.04%戊烷磺酸钠溶液 甲醇=85 15。

2.2 检测波长：291nm

2.3 柱温：室温

试样制备：

1. 称取供试品

精密称取本品适量。

2. 对照品溶液的制备

精密称取维生素B6对照品适量，同供试品配制，摇匀，即得。

3. 供试品溶液的制备

将供试品加流动相溶解并定量稀释制成每1mL含有约0.1mg的溶液，摇匀，即得。

注：“精密称取”系指称取重量应准确至所取重量的千分之一。“精密量取”系指量取体积的准确度应符合国家标准中对该体积移液管的精度要求。

操作步骤：

分别精密吸取上述对照品溶液与供试品溶液各10μL 注入高效液相色谱仪，用紫外吸收检测器，于波长291nm处测定维生素B6的吸收值，计算出其含量。

参考文献：

中华人民共和国药典，国家药典委员会编，化学工业出版社，2005年版，二部，p.668。