单向扩散试验有下列影响因素：
① 抗血清的亲和力、特异性、及效价。要求亲和力强，特异性好、效价高。注意存放的方法，防止效价下降。
② 标准曲线必须在每次测定时同时制作，绝不可一次作成，长期应用。
③ 测定时必须加测质控血清，以保证定量的准确性。
④ 有时出现扩散环呈现两重的双环现象，这是出现了抗原性相同的两个组分，其扩散率不同，例如α重链病血清中出现的α重链和正常的 IgA两种成分并存，皆与抗IgA 抗体发生反应，就形成内外两重环。
⑤ 在单扩试验时，有时回出现结果与真实含量不符，这主要出现在 Ig 测定中医学`教育网搜集整理。如用单克隆抗体或骨髓瘤纯抗原免疫动物获得的抗血清，都存在单一结合价的现象，若用此作为单扩试剂测量正常人的多态性抗原，则抗体相对过剩，是沉淀圈直径变小，测量值降低。
⑥ 测得假阳性升高现象与上面相反，如用多克隆抗体测定单克隆病，则抗原相对过剩（单一抗原决定簇） ，致使沉淀圈呈不相关扩大，从而造成某一成分的伪性增加。
