医学教育网小编搜集了有关主管药师考试的复习知识点，供广大考生参考；如下

1.多肽链的分离

在测定一个蛋白质的结构以前，首先必须保证被测蛋白质的纯度，使结果准确可靠。其次要了解它的分子量和亚基数，按照其亚基数将蛋白质分成几个多肽链。

1）肽链的拆开

蛋白质分子多肽链的连接有共价结合和非共价结合两种。要拆开以共价结合的-S-S-连接的多肽链，必须采用的化学处理方法常有：

①过甲酸氧化

用氧化剂过甲酸断裂-S-S-.这个反应一般在0℃下进行2小时左右，两个S就全部能转变成磺酸基，这样被氧化的半胱氨酸称为磺基丙氨酸。

②巯基乙醇还原

利用还原剂巯基乙醇亦可使蛋白质的-S-S-断裂。当高浓度的巯基乙醇在pH8？条件下室温保温几小时后，可以使-S-S-定量还原为桽H.与此同时反应系统中还需要有8摩尔脲或6摩尔盐酸胍使蛋白质变性，多肽链松散成为无规则的构型，此时还原剂就可作用于-S-S-.此反应是可逆的，因此要使反应完全，疏基乙醇的浓度必需在0.1-0.5摩尔。

③Cleland试剂的还原作用

Cleland′s指出二硫赤苏糖醇（dithioerythriotol）及二硫苏糖醇（dithiothriotol）在氧化还原能力上是比较强的试剂，只要0.01摩尔就能使蛋白质的-S-S-还原，反应基本与疏基乙醇相似，且在许多球蛋白反应中，可以不用变性剂。

2）末端分析

（1）N-末端测定

A.二硝基氟苯法（FDNB，DNFB）：1945年Sanger提出此方法，是他的重要贡献之一。

（2）C-末端分析

A.肼解法：这是测定C-末端最常用的方法。将多肽溶于无水肼中，100℃下进行反应，结果羧基末端氨基酸以游离氨基酸状释放，而其余肽链部分与肼生成氨基酸肼。

3）氨基酸组成分析

在进一步分析多肽链的氨基酸顺序之前，首先应了解它是由那几种氨基酸组成的，每种氨基酸有多少？分析组成的方法有：

①层析法

将多肽链完全酸水解成游离氨基酸，然后进行Dansyl标记，聚酰胺薄膜层析，此方法在蛋白质结构分析中是一种超微量的分析术，但此方法用于定量分析尚不够准确。

②离子交换层析法

Spaekman等发展了一种精确的氨基酸组分的定量方法。他们采用磺酸型的离子交换树脂，这是一种高分子量的固体聚苯乙烯，带有大量的功能基团，磺酸基在低pH和低离子强度条件下，根据氨基酸的酸碱性，氨基酸带正电，于是替换下树脂上的Na+，借助静电作用而结合到磺酸基上。

2.多肽链的降解

多肽链的氨基酸组成往往是比较复杂，因此直接分析多肽的氨基酸顺序还是很困难的，多采用将多肽链进一步降解成为更小的片段，然后再行分析。肽键的裂解是一级结构研究工作中的重要问题，它要求裂解点少，选择性强，而且反应产率高，目前主要有化学法和酶解法两类。

1）化学法

（1）溴化氰法 是最理想的化学方法，能选择性断裂甲硫氨酸所在的肽键

（2）部分酸水解法

Sanger在分析胰岛素的一级结构中采用了此法，即用0.1N盐酸在110℃或用6N盐酸在37℃水解。这种部分酸水解的方法特异性不强，因此对大片段的蛋白质和肽均不合适。

（3）羟胺法

这种方法近十年来开始受人注意，羟胺能专一性地裂解AsnGly的肽键，酸性条件下裂解Asn-Pro肽键。已用于某些蛋白质的分析。

（4）N-溴代琥珀酰亚胺法

主要裂解Try处的肽键，五十年代研究较多。但由于它也能断裂TyrHis肽键，因此应用不广。

2）酶解法

酶水解法较化学法具有更多的优越性，使用也更广泛。因其具有较高专一性，而且水解产率较高，所以可以选择各种不同专一性的酶进行专一性的断裂。

常用的酶有胰蛋白酶、糜蛋白酶、胃蛋白酶和嗜热菌蛋白酶。

胰蛋白酶专一断裂Lys，Arg的羧基侧肽键，如果对Lys，Arg，CysH进行化学修饰可改变胰蛋白酶的断裂性质。

（1）赖氨酸的修饰。将Lys用顺丁烯二酸酐或甲基顺丁烯二酸杆修饰，则胰蛋白酶仅使Arg肽键断裂。

3.肽段的分离

大部分肽段的分离主要通过凝胶过滤法，由于大分子肽溶解度小。往往采用甲酸、醋酸、丙酸等有机溶剂使之溶解。单用凝胶过滤法分离之肽一般纯度不高，常需辅以离子交换层析法，大片段肽可用离子交换葡聚糖作载体，小肽则多用Dowex-50等树脂。

小肽分离还常采用高压电泳与层析相结合的指纹图谱法，得到纯净肽。

4.肽的顺序分析

在蛋白质一级结构的测定中，肽的顺序分析是比较重要的一步。肽的顺序分析也有化学法和酶解法两种。

5.二硫键定位

蛋白质分子不经任何处理，直接用酶水解，检出其中二硫键的肽段，然后将二硫键拆开，分别测定两个肽的顺序，将此两肽结构与测出的一级结构比较，就能找出相应的二硫键的位置。