(一)抗原和抗体浓度、比例
抗原和抗体浓度、比例对抗原抗体反应影响最大，是决定性因素，如前所述。
(二)电解质
抗原与抗体特异性结合后，其亲水性减弱，分子表面所带的电荷易受电解质影响而失去，复合物间的排斥力下降，导致第一阶段已形成的可溶性结合物能进一步联结，出现明显的凝集或沉淀现象。试验中常用0.85％的NaCl溶液作为稀释液，以提供适当浓度的电解质。
(三)温度
适当的温度可增加抗原与抗体分子碰撞的机会，加速结合物体积的增大，一般而言温度越高，形成可见反应的速度越快，但过高则会使抗原或抗体变性失活，影响试验结果。一般在37℃下进行试验，但也有些抗原抗体在4℃下进行反应较好。
(四)酸碱度
pH过高或过低都将直接影响抗原或抗体的理化性质。例如，医学教|育网|收集整理当pH降至3.0左右时，因接近细菌抗原的等电点，细菌表面蛋白或其他基团所带的电荷消失，其相互间的排斥力丧失而导致非特异性酸凝集，影响试验的可靠性。
