透射比浊法的基本原理是测定一定体积的溶液通过的光线量,当光线通过时,由于溶液中存在的抗原抗体复合物粒子对光线的反射和吸收,引起透射光的减少,测定的光通量和抗原抗体复合物的量成反比。
(一)原理
抗原抗体在一定缓冲液中形成免疫复合物(IC),当光线透过反应溶液时,由于溶液内复合物粒子对光线的反射和吸收,引起透射光减少,免疫复合物量越多,透射光越少,即光线吸收越多,可用吸光度表示。吸光度和复合物的量成正比,当抗体量固定时,与待检抗原量成正比。用抗原标准品建立标准曲线,可测出待检抗原含量医学教.育网搜集整理。
附:免疫胶乳比浊法
原理:选择一种大小适中,均匀一致的胶乳颗粒,吸附抗体后,当遇到相应抗原时,则发生凝集,单个胶乳颗粒在入射光波长之内,光线可透过,当两个胶乳凝集时,则使透过光减少。这种减少的程度与胶乳凝集成正比,与抗原量成正比。该法敏感度高,试剂稳定,因反应液中无PEC沉淀剂的影响,个体IC对结果影响也小,所以结果稳定、可靠,特异性好;不需特殊仪器设备,一般分光光度计、自动化生化分析仪均可使用。
(二)实验要求
1.溶液中存在的抗原抗体复合物分子应足够大,分子太小则阻挡不了光线的通过。
2.溶液中抗原抗体复合物的数量要足够多,如果数量太少,溶液浊度变化不大,对光通量的影响不大。
3.透射比浊是依据溶液中颗粒形成或增加而使透射光减弱的原理来定量检测抗原,检测仍需抗原抗体反应的温育时问,检测时间较长。
4.检测用抗体一般应选择高亲和力的抗体,在检测中要保证抗体过量。应制备标准曲线。