临床医学检验职称

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荧光定量PCR检测细菌染色体上基因拷贝数

  摘 要:目的建立一种以细菌染色体上1个已知拷贝管家基因作为基准、通过荧光定量PCR检测其他被检基因拷贝数的方法。

  方法 利用荧光定量PCR检测El Tor型霍乱弧菌染色体上目的基因zot与基准基因thyA的Ct(threshold cycle)值差值,根据已知拷贝数菌株N16961的两基因Ct值之差来推算待测菌株中zot基因的拷贝数。

  结果 利用thyA基因作参照,确定11株E1 Tor型霍乱弧菌中zot基因的拷贝数在1~5个之间,对较少拷贝数的检测与Southern blot确认的相同,对多拷贝数检测优于Southern blot的判定。

  结论 本方法可以准确检测菌株染色体上的基因拷贝数。

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